Warsztaty: Real-time PCR w oznaczeniach jakościowych i ilościowych

Tematyka

ZAPRASZAMY:
biologów molekularnych, biotechnologów i diagnostów laboratoryjnych (z zakresu genetyki medycznej i poradnictwa genetycznego)

Prowadzący:
• dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu
• dr Błażej Rubiś, Katedra i Zakład Chemii Klinicznej i Diagnostyki Molekularnej

PROGRAM:
DZIEŃ 1 | 28 czerwca 2012 Technika Real-time PCR - Oznaczenia ilościowe

9.55 Rozpoczęcie warsztatów

10.00 Wykład: Podstawy techniki Real-time PCR
• podstawy techniki Real-time PCR
• formaty detekcji (sondy, barwniki, fluorochromy)
• nomenklatura związana z techniką Real-time PCR (Ct, Cp, ΔΔCt, krzywa standardowa, wydajność reakcji)

11.00 Projektowanie eksperymentu
• dobór materiału badawczego
• przygotowanie prób (izolacja kwasów nukleinowych, warunki RT PCR)
• zastosowanie Real-Time do oznaczania ilościowego kwasów nukleinowych – kwantyfikacja względna i bezwzględna

12.00 Przerwa na kawę

12.15 Projektowanie eksperymentu - c.d.
• projektowanie starterów i sond – dostępne oprogramowanie komercyjne i darmowe, jak i ile zamawiać, przechowywanie, przygotowanie roztworów roboczych
• dobór genów referencyjnych – standaryzacja wyników
• eksperymenty typu dose-course i time-course

13.15 Przerwa na obiad

14.15 Przygotowanie do eksperymentu

14.30 Część praktyczna – oznaczenie względne (relative quantification) – reakcja multiplex w formacie Dual-color z kompensacją kolorów
W trakcie reakcji:
• Universal Probe Library (UPL)
• Panele Real-Time Ready

16.15 Interpretacja wyników

16.30 Sesja troubleshooting w oznaczeniach ilościowych

17.00 Zakończenie dnia

DZIEŃ 2 | 29 czerwca 2012 Real-Time w oznaczeniach jakościowych – genotypowanie

9.00 Wprowadzenie do genotypowania
• SNP, mutacje i ich znaczenie
• genotypowanie techniką real-time PCR jako alternatywa dla RFLP i SSCP

9.30 Projektowanie eksperymentu
• formaty detekcji stosowane w analizie jakościowej
• projektowanie sond HybProbe i Simple Probe – LightCycler Probe Design Software
• gene scanning – High Resolution Melting (HRM)
• genotypowanie typu end-point – sondy hydrolizujące
10.45 Przerwa na kawę

11.00 Przygotowanie do eksperymentu

11.15 Część praktyczna – genotypowanie metodą HRM
W trakcie reakcji – oznaczenie statusu metylacji z zastosowaniem metody HRM

13.00 Interpretacja wyników

13.15 Przerwa na lunch

14.15 Przygotowanie do reakcji genotypowania za pomoca sond (HybProbe /Taqman)
W trakcie reakcji – troubleshooting w reakcjach jakościowych

15.30 Interpretacja wyników

16.00 Zakończenie

Więcej informacji: http://www.cemed.pl/spotkania/2012/rt_pcr3/index.php

Rejestracja: http://www.cemed.pl/spotkania/2012/rt_pcr3/formularz_pr.php